紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)原理是由于分子中的某些基團(tuán)吸收了紫外可見(jiàn)輻射光后,發(fā)生了電子能級(jí)躍遷而產(chǎn)生的吸收光譜。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu),其吸收光能量的情況也就不會(huì)相同,因此,每種物質(zhì)就有其*的、固定的吸收光譜曲線,可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長(zhǎng)處的吸光度的高低判別或測(cè)定該物質(zhì)的含量,這就是分光光度定性和定量分析的基礎(chǔ)。
紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)原理的使用注意事項(xiàng)
(1)預(yù)熱是保證儀器準(zhǔn)確穩(wěn)定的重要步驟。
(2)比色皿的清潔程度,直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果.因此,特別要將比色皿清洗干凈.先用自來(lái)水將用過(guò)的比色皿反復(fù)沖洗,然后用蒸餾水淋洗,倒立于濾紙片上,待干后再收回比色皿盒中.必要時(shí),還要對(duì)比色皿進(jìn)行更精細(xì)的處理,如用濃硝酸或鉻酸洗液浸泡,沖洗。
(3)比色皿與分光光度計(jì)應(yīng)配套使用,否則會(huì)引起較大的實(shí)驗(yàn)誤差.比色皿不能單個(gè)調(diào)換1.37200型光柵分光光度計(jì)的使用注意事項(xiàng)。
(4)比色皿內(nèi)盛液應(yīng)為其容量的2/3,過(guò)少會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,過(guò)多易在測(cè)量過(guò)程中外溢,污染儀器.比色皿中試樣裝入量應(yīng)為2/3~3/4之間。
(5)拿放比色皿時(shí),應(yīng)持其"毛面",杜絕接觸光路通過(guò)的"光面".如比色皿外表面有液體,應(yīng)用綢布拭干,以保證光路通過(guò)時(shí)不受影響。
(6)若待測(cè)液濃度過(guò)大,應(yīng)選用短光徑的比色皿,一般應(yīng)使吸光度讀數(shù)處于0.1~0.8范圍內(nèi)為宜.由于測(cè)定空白,標(biāo)準(zhǔn)和待測(cè)溶液時(shí)使用同樣光徑的比色皿,故不必考慮因光徑變化而引起的影響。
物質(zhì)的吸收光譜本質(zhì)上就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長(zhǎng)的光能量,相應(yīng)地發(fā)生了分子振動(dòng)能級(jí)躍遷和電子能級(jí)躍遷的結(jié)果。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu),其吸收光能量的情況也就不會(huì)相同,因此,每種物質(zhì)就有其*的、固定的吸收光譜曲線,可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長(zhǎng)處的吸光度的高低判別或測(cè)定該物質(zhì)的含量,這就是分光光度定性和定量分析的基礎(chǔ)。分光光度分析就是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)問(wèn)相互作用的有效手段。
此后,紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)經(jīng)不斷改進(jìn),又出現(xiàn)自動(dòng)記錄、自動(dòng)打印、數(shù)字顯示、微機(jī)控制等各種類(lèi)型的儀器,使光度法的靈敏度和準(zhǔn)確度也不斷提高,其應(yīng)用范圍也不斷擴(kuò)大。紫外可見(jiàn)分光光度法從問(wèn)世以來(lái),在應(yīng)用方面有了很大的發(fā)展,尤其是在相關(guān)學(xué)科發(fā)展的基礎(chǔ)上,促使分光光度計(jì)儀器的不斷創(chuàng)新,功能更加齊全,使得光度法的應(yīng)用更拓寬了范圍。目前,分光光度法已為工農(nóng)業(yè)各個(gè)部門(mén)和科學(xué)研究的各個(gè)領(lǐng)域所廣泛采用,成為人們從事生產(chǎn)和科研的有力測(cè)試手段。
分光光度分析就是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。它是帶狀光譜,反映了分子中某些基團(tuán)的信息??梢杂脴?biāo)準(zhǔn)光圖譜再結(jié)合其它手段進(jìn)行定性分析。
根據(jù)Lambert-Beer定律說(shuō)明光的吸收與吸收層厚度成正比,比耳定律說(shuō)明光的吸收與溶液濃度成正比;如果同時(shí)考慮吸收層厚度和溶液濃度對(duì)光吸收率的影響,即得朗伯-比耳定律。即A=εbc,(A為吸光度,ε為摩爾吸光系數(shù),b為液池厚度,c為溶液濃度)就可以對(duì)溶液進(jìn)行定量分析。
將分析樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣品以相同濃度配制在同一溶劑中,在同一條件下分別測(cè)定紫外可見(jiàn)吸收光譜。若兩者是同一物質(zhì),則兩者的光譜圖應(yīng)*一致。如果沒(méi)有標(biāo)樣,也可以和現(xiàn)成的標(biāo)準(zhǔn)譜圖對(duì)照進(jìn)行比較。這種方法要求儀器準(zhǔn)確,精密度高,且測(cè)定條件要相同。
實(shí)驗(yàn)證明,不同的極性溶劑產(chǎn)生氫鍵的強(qiáng)度也不同,這可以利用紫外光譜來(lái)判斷化合物在不同溶劑中氫鍵強(qiáng)度,以確定選擇哪一種溶劑。